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　　以下是?人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA試劑盒?的詳細(xì)實驗使用說明，綜合各品牌試劑盒通用操作流程及注意事項整理：

　　BS-1395人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒組成?

　　預(yù)包被微孔板?：抗IDUA抗體包被的96孔或48孔板?。

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：濃度梯度為0.156-10 ng/mL(具體以說明書為準(zhǔn))?。

　　檢測抗體?：HRP標(biāo)記的IDUA抗體?。

　　底物溶液?：TMB顯色液?。

　　終止液?：酸性溶液(如2M H?SO?)?。

　　洗滌緩沖液?：20-25倍濃縮液，需稀釋使用?。

　　二、樣本處理?

　　適用樣本?：血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細(xì)胞裂解液、組織勻漿等?。

　　預(yù)處理要求?：

　　血清/血漿：離心去除雜質(zhì)(1000×g，15-20分鐘)，避免溶血?。

　　組織樣本：勻漿后離心取上清?。

　　保存條件?：短期2-8℃，長期需-20℃凍存，避免反復(fù)凍融?。

　　三、實驗步驟?

　　試劑平衡?：所有組分室溫平衡15-30分鐘(TMB需避光)?。

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品/樣本每孔加50-100μL，復(fù)孔建議?。

　　空白孔加稀釋液對照?。

　　孵育?：37℃避光孵育1-5小時(具體時間參考說明書)?。

　　洗滌?：

　　棄液后每孔加洗滌液300μL，靜置30秒后拍干，重復(fù)5次?。

　　加檢測抗體?：每孔加HRP標(biāo)記抗體100μL，37℃孵育1小時?。

　　顯色?：

　　加TMB底物100μL，避光反應(yīng)10-30分鐘(顯藍(lán)色)?。

　　加終止液50μL，顏色轉(zhuǎn)為黃色?。

　　檢測?：450nm波長測OD值(參考630nm校正)?。

　　四、數(shù)據(jù)分析?

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，擬合四參數(shù)曲線?。

　　濃度計算?：樣本OD值代入曲線方程，乘以稀釋倍數(shù)?。

　　五、注意事項?

　　質(zhì)量控制?：

　　每板需做標(biāo)準(zhǔn)曲線及復(fù)孔，CV%應(yīng)<10%?。

　　樣本OD值超范圍時需稀釋后重測?。

　　操作細(xì)節(jié)?：

　　避免板孔干燥，孵育時覆蓋封板膜?。

　　加樣需精準(zhǔn)，建議使用多道移液器?。

　　保存條件?：

　　未用板條密封保存于2-8℃或-20℃?。

　　底物避光，終止液腐蝕性需防護(hù)?。

　　六、技術(shù)參數(shù)?

　　檢測范圍?：0.156-10 ng/mL(靈敏度0.039 ng/mL)?。

　　精密度?：板內(nèi)CV<8%，板間CV<10%?。

　　注：以上資料僅供參考，如需具體品牌說明，可聯(lián)系供應(yīng)商獲取完整文檔?。

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